课题背景：由2010年10月-2011年3月来中国医科大学附属盛京医院辅助生殖门诊78例男性不育患者作为研究对象, 采用精液常规检测精子情况, 并检测患者性激素水平。选择出无精子症患者（18例）和少精子症患者（20例），对这些患者进行EDTA抗凝静脉血提取DNA通过QF-PCR(Quantitative fluorescence PCR, QF-PCR)进行基因检测。

研究方法：通过对无精和少精患者进行QF-PCR检测，以无精和少精患者外周血基因组DNA 为模板选择X,Y染色体杂合度较高的STR(含AZFc 区STR DYS448)和特异性位点，以及SRY 基因。设计引物并用不同颜色的荧光在其正向引物5′末端进行标记，通过多重PCR扩增AZFa、AZFb、AZFc区各2个序列标签位点(Sequence tagged sites, STS),并以健康已生育男性DNA为阳性对照, 女性DNA为阴性对照。通过PCR产物经琼脂糖电泳检测荧光强度，来判断AZF微缺失和染色体突变。

研究结果：由于AZF区域是否发生微缺失与无精子症密切相关，可以用QF-PCR方法在AZFa、AZFb、AZFc 3个区分别设计荧光标记引物sY84和sY86、sY127和sY134、sY254和sY255来检测AZF区域是否存在染色体细微结构的异常,来进行男性不育的遗传学诊断。同时通过基因对照来寻找出染色体突变（47, XXY 患者和46, XX 性反转患者），并且可以区分出46,XX(SRY+)和46, XX(SRY-)患者。

点评：本文通过用QF-PCR进行多位点基因检测并进行分析，更迅速、直接地检测到染色体异常区域。可以避免临床上临床上由于诊断医师经验不足造成误诊和延后诊断。但是通过文章可以看出由于QF-PCR还会受到检测位点选择、STR位点杂合度等因素的影响，所以对临床患者选择方面会存在一定的局限性。天昊公司的拷贝数变异检测专利技术AccuCopy可以替代传统的定量PCR，事实上，在男性不孕不育方面，天昊公司已经使用Accucopy技术与上海的科研单位合作了相关课题，从数据来看。AccuCopy技术具有更为准确，更高通量，高灵活性，更低成本等优势。

Abstract: To assess the clinical practice of quantitative fluorescence PCR (QF-PCR) in genetic diagnosis of male infertilitypatients, 78 nonobstructive male infertility patients were pooled for semen routine screening and sexual hormone determination;QF-PCR was applied to detect the polymorphic short tandem repeat (STR) and specific sequence tagged site (STS)of sex chromosomes; routine chromosome G-band was used for karyotype analysis and PCR was used for the detection ofAZF microdeletion. Routine screening of semen found 18 azoospermia and 20 oligospermia patients (48.72%). Three patientswith 47, XXY, two with 46,XX(SRY+)and one with AZFc microdeletion were detected using QF-PCR techniquewhich were verified by chromosome G-band and PCR. This study suggests that QF-PCR is a comprehensive, rapid andreliable method for detecting abnormal chromosomal regions and microstructures compared with traditional tests and provides a better candidate for diagnosis of male infertility caused by chromosomal anomalies and gene mutation.